שיטות מיקרוביולוגיות ללימוד של מים, אדמה ואוויר

מיקרו-אורגניזמים - קטנטן, יצורים חד-תאיים בעיקר, אשר נפוצים בטבע. הם נמצאים בכל מדיה (אוויר, קרקע, מים) אצל בני אדם ובעלי חיים, בצמחים.

גיוון מספר איכותני של אורגניזמים תלויים בעיקר על תרכובות תזונתיות. אבל חשוב גם כמו לחות, טמפרטורה, אוורור פעולה של שמש וגורמים נוספים.

природных сред позволяют выявить наличие патогенных микроорганизмов, определить их количество и, в соответствии с полученными результатами, выработать меры по устранению или предупреждению инфекционных заболеваний. שיטות תקשורת טבעית סניטרית ומחקרי מיקרוביולוגית יכולות לזהות הנוכחות של פתוגנים ולקבוע הסכום שלהם בהתאם לתוצאות שהתקבלו, כדי לפתח אמצעים כדי להסיר או למנוע מחל זיהומיות. בנוסף, חשבון כמוני נדרש דוגמנות אקולוגית לבין ההתפתחות של התהליכים הטבעיים של ממשל. . הבה נבחן עוד מה הן השיטות של בדיקה מיקרוביולוגית.

אדמת

זה נחשב על ידי חוקרים כאחד המסלולים האפשריים של העברת מחלות זיהומיות. עם חולה אנוש הפרשות או בעלי חיים פתוגנים חודר קרקע. חלקם, בפרט, נבג, יכול להתמיד בקרקע במשך תקופה ארוכה (לפעמים במשך עשרות שנים). позволяют определить "микробное число" (кол-во микроорганизмов в грамме грунта), а также коли-индекс (количество кишечных палочек). פתוגנים בסתיו באדמה כגון זיהומים מסוכנים כגון טטנוס, אנתרקס, בוטוליזם, וכן הלאה. שיטות הלימוד סניטריים-מיקרוביאליות של האדמה מאפשרים לך להגדיר "ספירת חיידקים" (מספר מיקרואורגניזמים בקרקע הגרם), ומדד coli (מספר E. coli) .

ניתוח קרקע: סקירה

следует в первую очередь отнести прямое микроскопирование и посев на плотную питательную среду. שיטות בדיקה מיקרוביולוגיות של הקרקע יש לייחס מיקרוסקופיה ישירה בעיקר והתרבות על מוצק מזין בינוני. אוכלוסיות של מיקרואורגניזמים והקבוצות שלהם המאכלסות את האדמה, נבדלות על מעמדו הטקסונומי ופונקציות אקולוגיות. במדע, הם מאוחדים תחת מונח גנרי "biota האדמה." פריימר - גידול מספר עצום של מיקרואורגניזמים. בשנת הגרם של קרקע קיימת בין 1 ל -10 מיליארדים התאים שלהם. בסביבה זו, פעיל לוקח פירוק של חומר אורגני, בהשתתפות מיקרואורגניזמים saprophytic השונים.

מחקרים מיקרוסקופים של שיטת מיקרוביולוגית: המדרגות

ניתוח של המדיום מתחיל עם דגימה. לשם כך, קלוף בעבר סכין אלכוהול מגוררת (את יכול לשמש). לאחר מכן, הכנת המדגם. השלב הבא - לספור תאי מריחות מוכתמות. שקול כל שלב בנפרד.

דגימה

בסופו של קרקעות חקלאיות נוטה דגימה שנלקחה מעומק של השכבה כולה. ראשית סיר 2-3 סנטימטר מעל הקרקע, כפי שהוא עשוי להיות נוכח גם microflora זר. לאחר מכן, עם שטח של קרקע למד לקחת פסלים. אורכו של כל אחד מהם חייב לציית עובי השכבה שממנו אתה רוצה לטעום.

על מגרש של 100-200 מ"ר. 7-10 מ 'דגימות שנבחרו. משקל כל - בסדר גודל של 0.5 ק"ג. הדגימות חייבות להיות מעורבות באופן יסודי בתוך השקית. אז קח המדגם הממוצע במשקל כ 1 ק"ג. זה צריך להיות ממוקם קלף (סטרילי) חבילה סגורה בתוך שקית בד. לפני לכוון ניתוח של מדגם לאחסן במקרר.

הכנת סקר

האדמה העוררת שפכו על זכוכית יבשה. שלה מראש לנגב עם אלכוהול לשרוף מעל המבער. עם אדמת מרית מעורבת באופן יסודי והתרחב באופן שווה. זוהי חובה להסיר את השורשים וגורמים זרים אחרים. כדי לעשות זאת, להשתמש בפינצטה. לפני פינצטה תפעול מרית מעל מבער ניצת נותנים לו להתקרר.

מגרשי הקרקע השונים המופצים על הזכוכית, שנבחר מנות קטנות. הם שקלו בצלחת חרסינה על סולם טכני. является специальная обработка образца. שיטה מיקרוסקופית צעד מנדטורי של מחקרי מיקרוביולוגיות היא העיבוד המיוחד של המדגם. 2 חייבים להיות מוכנים מראש, בקבוק סטרילי. הגודל שלהם לא יעלה על 250 מ"ל. אחד הצלוחיות נמזג לתוך 100 מיליליטר של מים ברז. כי זה לוקח דגימת נוזל 0.4-0.8 מ"ל של אדמה רטובה על הדבק. התערובת צריכה להיות שפשפה עם עלי אצבע או גומי עבור 5 דקות.

מים מן הבקבוק הראשון הועברו לתוך בקבוק ריק אדמת המונית. בהמשך, עיסה את גבה. אחרי מונית זה מועברת בקבוק ליד להבת המבער. מיכל עם ההשעיה אדמת התערער על שייקר עבור 5 דקות. לאחר מכן, הותר לו להתיישב במשך כ 30 שניות. זה הכרחי על מנת לאפשר חלקיקים גדולים להתיישב. אחרי חצי דקה המוני משמש להכנת ההכנה.

Cell ספירה על מריחות קבועות

, разработанному Виноградским. מחקר מיקרוסקופי ישיר של הקרקע מתבצע בשיטת מחקרי מיקרוביולוגיות, שפותחה Vinogradskii. בכרך מסוים של ההשעיה נספר את מספר התאים של מיקרואורגניזמים. לימוד מריחות קבועות יכול לאחסן תרופות בטווח הארוך ולבצע חישובים בכל עת.

הכנת התרופה כדלקמן. כמות מסוימת של תרחיף (בדרך כלל 0.02-0.05 מ"ל) מוחל עם micropipette לשקופית. לפתרון זה נוסף ירידה של אגר-אגר (פוליסכריד agaropectin תערובת והוציא agarose מאצות חומות ואדום הים שחור), עורר במהירות משתרע על פני שטח 4-6 מ"ר. סנטימטר. אוויר יבש וקבוע פאפ במשך 20-30 דקות. אלכוהול (96%). בא, התרופה טבולה במים מזוקקים והושמה דקות p-p קרבולי erythrosine 20-30.

לאחר מכתים, הוא שטופים מיובשים באוויר. ספירת תאי ביצע מן העדשה טבילה.

זורע על תקשורת מוצקה

позволяют выявить большое количество микроорганизмов. שיטות מיקרוסקופיות לבדיקת מיקרוביולוגית יכולות לזהות מספר רב של מיקרואורגניזמים. אבל למרות זאת, השיטה של חיסון היא הנפוצה ביותר בפועל. מהותו מורכבת זריעת הסכום (השעית הקרקע) הסמים בצלחת פטרי על מדיום מוצק.

позволяет учитывать не только количество, но и групповой, а в ряде случаев и видовой состав микроскопической флоры. שיטה זו של מחקר מיקרוביולוגים לוקחת בחשבון לא רק את הכמות אלא גם קבוצה, ובמקרים מסוימים, ואת הרכב המינים של הצמחייה המיקרוסקופית. ספירה מספר המושבות המיוצרות, בדרך כלל מלמטה של צלחת פטרי אור מועבר. על השטח מחושב להציב נקודת סמן או דיו.

ניתוח מים

מיקרופלורת בגוף המים, ככלל, משקפת את הרכב מיקרוביאלי של האדמה סביבו. имеют особое практическое значение при изучении состояния конкретной экосистемы. בהקשר זה, שיטות ניתוח סניטריים-מיקרוביאליות של מים ואדמה הם בעלי חשיבות מעשית בפרט במחקר של מדינת מערכת אקולוגית מסוימת. המים הטריים מכילים, ככלל, Cocci, חיידקים בצורת מוט.

אנאירוביים במים נמצאים בכמויות קטנות. ככלל, הם מתרבים בתחתית גופי מים, בבוץ, לקיחת חלק בתהליך של טיהור. אוקיינוסים וימים מיקרופלורת לתועלתו מיוצגות halophytic חיידקים (halophilic).

בתוך המים, בארות תהום כמעט אין מיקרואורגניזמים. זאת בשל יכולת הסינון של שכבת הקרקע.

считаются определение микробного числа и коли-титра либо коли-индекса. בשיטות מקובלות של מחקר מי מיקרוביולוגית נחשב ההגדרה של חיידקים כיילו-coli או אם-מדד. המדד הראשון מגדיר את מספר חיידקי מיליליטר נוזל 1. מדד Coli מייצג את מספר קוליפורמים נוכח ליטר מים, ואם כייל - המספר המינימלי או נוזל דילול המרבי שבו הם עדיין יכולים להיות מזוהים.

קביעת מספר חיידקים

בדיקת מיקרוביולוגית סניטרית שיטה זו של מים היא כדלקמן. בשנת 1 מ"ל של מים נקבע מספר אנאירוביים mesophilic ו פקולטטיבי (ביניים) aerobes מסוגל על אגר בשר-peptone (המדיום העיקרי) בשעה 37 מעלות. במהלך היום כדי ליצור מושבות גלויות בהגדלה של 2-5 עמ '. או בעין בלתי מזוינת.

является посев. צעד המפתח של שיטת ניתוח מיקרוביולוגיות של מים נזרע. בגלל כל דגימה נזרעה לפחות 2 כרכים שונים. כאשר ניתוח מי ברז בכל כוס עשוי 1-0.1 מ"ל של נוזל טהור מזוהמים 0.01-.001 מ"ל. עבור חיסון של 0.1 מ"ל או נפח קטן של נוזל הוא מדולל במים מזוקקים (סטרילי). בעקביות להכין דילולים עשרוניים. 1 מיליליטר של כל אחד מהם נעשה בשתי בצלחות פטרי.

רבייה מלאה אגר מזין. זה צריך קודם להמיס, ומצננים עד 45 מעלות. לאחר הערבוב, המדיום הפעיל נותר על משטח אופקי עבור מיצוק. בשעה 37 מעלות. יבולים גדלים לאורך כל היום. позволяет учитывать результаты на тех чашках, где количество колоний находится в пределах от 30 до 300. השיטה נחשבת מחקר מי מיקרוביולוגית לוקחת בחשבון את התוצאות של אלה מנות שבן מספר מושבות בטווח של 30 עד 300.

אוויר

זה נחשב קרקע מעבר מיקרואורגניזמים. являются седиментация (оседание) и аспирация. השיטות העיקריות של מחקרי מיקרוביולוגיות הן שקיעת אוויר (יישוב) ואת שאיפה.

סביבת אוויר מיקרופלורת מחולקת באופן שרירותי לתוך משתנה וקבוע. הקבוצה הראשונה כוללת שמרים, Cocci chromogenic, coli חיידק נבג נושאות ומיקרואורגניזמים אחרים כי הם עמידים בפני ייבוש, חשיפה לאור. נציגי microflora משתנה, חודר לחלל האוויר מן הגידול הטבעי שלהם, ארוך לשמר את חיוניותם.

באוויר של ערים גדולות מיקרואורגניזמים הרבה יותר בסביבה האווירית של אזורים כפריים. במהלך הימים, יערות הם חיידקים מעט מאוד. טיהור האוויר להקל משקעים: שלג וגשם. חיידקים בפנים הרבה יותר מאשר בחללים פתוחים. מספרם גדל בחורף בהיעדר אוורור קבוע.

הַשׁקָעָה

считается простейшим. שיטה זו של מחקר מיקרוביולוגי במיקרוביולוגיה נחשבת הפשוטה. היא מבוססת על התיישבות של טיפות וחלקיקים על פני השטח אגר בצלחת פטרי פתוח תחת הכובד. שיטת שקיעה לא יכולה לקבוע במדויק את כמות חיידקים באוויר. העובדה היא כי בתוך כוס פתוחה לתפוס את שבר הקנס של חלקיקי אבק וטיפות חיידקים די קשה. על פני השטח שמר חלקיקים גדולים בעיקר.

שיטה זו אינה בשימוש לניתוח אוויר. סביבה זו מאופיינת בתנודתיות גדולה ממהירות זרימת אוויר. שקיעה עשויה, עם זאת, לשמש בהעדר מכשירים מתוחכמים יותר או מקור חשמל.

קביעת מספר החיידקים בביצוע שיטת Omelyansky. בהתאם לכך, במשך 5 דקות על פני שטח של 100 אגרו מרובע. ס"מ מתיישב מספר חיידקים נמצא 10 ליטרים של אוויר.

להזמין 535 "על האיחוד של שיטות מיקרוביולוגיות של חקירה"

ניתוח בקטריולוגיות תופס מקום חשוב בפעילות הקלינית ומעבדתיים המורכבות שמטרתה האבחון, המניעה והטיפול במחלות זיהומיות שונות. עם זאת, המחקר של הסביבה, הם אינם מוגבלים.

חשיבות מיוחדת הוא הניתוח בקטריולוגית של חומר ביולוגי בבתי חולים. עבור מחקר שנערך מתקני בריאות, גדל דרישות. המטרה להזמין "על האיחוד של שיטות מיקרוביולוגיות של חקירה" היא לשפר את הניתוח בקטריולוגית, שיפור האיכות והיעילות של אבחון מיקרוביולוגית.

בדיקה מיקרוסקופית של מריחות בנשים

זוהי שיטת מפתח של ניתוח לאבחון זיהומים, מחלות המועברות במגע מיני, וזיהומים אופורטוניסטים (חיידקים אופורטוניסטיים).

ניתוח מיקרוסקופי כדי להעריך את הרכב איכותי וכמותי של מיקרואורגניזמים, לבדוק את התקינות של הדגימה. לדוגמה, הנוכחות של אפיתל הנרתיק ב מטליות שנלקחו תעלת צוואר הרחם המצביעות על הפרה של כללי הבחירה של דגימה ביולוגית.

הוא אמר כי בדיקה מיקרוביולוגית במקרה זה מלווה בדרך כלל על ידי כמה בעיות. הם קשורים לעובדה בדרכי המין התחתונות הוא בדרך כלל מציג microflora מגוונת משתנה בגילים שונים. כדי לשפר את היעילות של המחקר פיתחו כללים סטנדרטיים.

אבחון של זיהומים ויראליים

זה מתבצע על ידי שיטות לזיהוי פתוגנים רנ"א ודנ"א. הם מבוססים בעיקר על קביעת רצפי נוקליאוטידים בחומר פתולוגי. לצורך כך, הבדיקות המולקולריות. הם מיוצרים באופן מלאכותי גרעין חומצות משלים (משלים) חומצות ויראלי שכותרתו עם תווית או ביוטין רדיואקטיבי.

הייחוד של השיטה הוא חזר העתקת קטע DNA הספציפי המכיל כמה מאה (או עשרות) נוקלאוטיד זוגות. שכפול (העתקה) הוא רחבה עשויה להתחיל רק ביחידות מסוימות. פריימרים (פריימרים) השתמשו כדי ליצור אותם. הם oligonucleotides מסונתז.

אבחון PCR (תגובת שרשרת פולימראז) היא פשוטה בביצוע. שיטה זו מאפשרת לך לקבל את התוצאה במהירות באמצעות כמות קטנה של חומר פתולוגי. באמצעות PCR לאבחון מזהה אקוטי, כרוני וזיהומים לטנטית (חבויים).

כאשר הרגישות של שיטה זו נחשבת עדיפה יותר. עם זאת, מערכות הבדיקה הנוכחיות אינן אמינות מספיק, אז אבחנת PCR לא יכולה להחליף שיטות מסורתיות לגמרי.